聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide，簡稱Acr)和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，簡稱Bis)在加速劑N，N，N￠，N￠—四甲基乙二胺(N，N，N￠，N￠—tetramethyl ethylenedia mine，簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(ammonium persulfate (NH4)2S2O8。
 
SDS PADE凝膠電泳原理
聚丙烯酰胺凝膠凝膠是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯(lián)劑N，N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(AP)，N，N，N’，N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交聯(lián)向成的具有網狀立體結構的凝膠，并以此為支持物進行電泳。
聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據不同蛋白質分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產生的不同遷移率將蛋白質分離成若干條區(qū)帶，如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質，蛋白質樣品電泳后，就應只分離出一條區(qū)帶。SDS是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質分子結合成復合物，使蛋白質帶負電荷的量遠遠超過其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質 SDS復合物在電泳時的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，只是分子量的函數。這種電泳方法稱為SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱SDS PAGE)。
 
由于SDS PAGE可設法將電泳時蛋白質電荷差異這一因素除去或減小到可以忽略不計的程度，因此常用來鑒定蛋白質分離樣品的純化程度，如果被鑒定的蛋白質樣品很純，只含有一種具三級結構的蛋白質或含有相同分子量亞基的具四級結構的蛋白質，那么 SDS PAGE后，就只出現(xiàn)一條蛋白質區(qū)帶。SDS PAGE可分為圓盤狀和垂直板狀、連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)。本實驗采用垂直板狀不連續(xù)系統(tǒng)。所謂“不連續(xù)”是指電泳體系由兩種或兩種以上的緩沖液、pH和凝膠孔徑等所組成。
 
SDS PADE凝膠配制
SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳是最常用的定性分析蛋白質的電泳方法，特別是用于蛋白質純度檢測和測定蛋白質分子量。
 
制備凝膠時首先要根據待分離樣品的情況選擇適當的分離膠濃度，例如通常使用的15％的聚丙烯酰胺凝膠的分離范圍是104～105，即分子量小于104的蛋白質可以不受孔徑的阻礙而通過凝膠，而分子量大于105的蛋白質則難以通過凝膠孔徑，這兩種情況的蛋白質都不能得到分離。所以如果要分離較大的蛋白質，需要使用低濃度如10％或7.5%的凝膠(孔徑較大)；而對于分離較小的蛋白質，使用的較高濃度凝膠(孔徑較小)可以得到更好的分離效果。分離膠聚合后，通常在上面加上一層濃縮膠(約1cm)，并在濃縮膠上插入樣品梳，形成上樣凹槽。濃縮膠是低濃度的聚丙烯酰胺凝膠，由于濃縮膠具有較大的孔徑(丙烯酰胺濃度通常為3～5％)，各種蛋白質都可以不受凝膠孔徑阻礙而自由通過。濃縮膠通常pH 值較低(通常pH = 6.8)，用于樣品進入分離膠前將樣品濃縮成很窄的區(qū)帶。濃縮膠聚合后取出樣品梳，上樣后即可通電開始電泳。
 
SDS PADE凝膠電泳經常應用于提純過程中純度的檢測，純化的蛋白質通常在SDS電泳上應只有一條帶，但如果蛋白質是由不同的亞基組成的，它在電泳中可能會形成分別對應于各個亞基的幾條帶。SDS PADE凝膠電泳具有較高的靈敏度，一般只需要不到微克量級的蛋白質，而且通過電泳還可以同時得到關于分子量的情況，這些信息對于了解未知蛋白及設計提純過程都是非常重要的。

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